組織処理は組織学の基礎であり、新鮮な生物学的サンプルを、顕微鏡検査の準備ができている安定したパラフィンが埋め込まれた標本に変換します。 この複雑なシーケンス (固定、脱水、クリアリング、浸透、および埋め込み) により、研究者、病理学者、および臨床医は、細胞および分子構造を研究し、医学研究と診断を進めることができます。 ただし、どの段階でも失敗すると、結果が損なわれ、組織が歪んだり、切片が不良になったり、診断の可能性が失われたりする可能性があります。 この包括的なガイドでは、組織処理における一般的な問題、その原因、および品質の結果を確実にするための実用的な解決策について説明します。 あなたが検査技師、生物医学研究者、または病理学の専門家であるかどうかにかかわらず、これらの課題を習得することは成功のために不可欠です。
組織学の組織処理では精度が重要ですが、ヒューマンエラー、不適切な技術、または機器の制限から問題が発生することがよくあります。 以下では、組織の収縮、サンプル中の空気の保持、埋め込みや浸透の悪さという3つの一般的な課題について、ワークフローを最適化するための原因と解決策の概要を説明します。
組織の収縮は組織学の一般的なハードルであり、しばしば細胞構造を歪め、正確な顕微鏡分析を妨げます。 研究によると、組織はパラフィンに埋め込まれるまでに20% 以上収縮し、形態と診断の信頼性に影響を与える可能性があります。 この問題は、ホルマリンのような固定剤が完全に浸透しないか、短時間、通常は6〜24時間未満で塗布され、組織の硬化が不十分な場合に発生します。 70% から100% へのジャンプが速すぎるなど、エタノール溶液を介した急速な脱水は、水を過度に抽出し、組織を歪めます。 ワックスの浸透中の過度の熱 (多くの場合60 °Cを超える) は、繊細なサンプルをさらに硬化または収縮させ、品質を低下させます。
固定を最適化する: リン酸緩衝ホルマリン溶液を使用して、タンパク質を架橋し、その3次元構造を維持することによって組織を安定させます。 サンプルのサイズに応じて、固定に6〜24時間かかり、歪みを最小限に抑えるために均一な浸透のために穏やかな攪拌を使用して、より大きな組織またはより密度の高い組織にこれを拡張します。
制御脱水: 70% 、90% 、および100% の段階的なエタノールシリーズに従い、15〜45分の手順でゆっくりと水を除去し、反りを防ぎます。 各ステージを監視して、組織をもろくまたは柔らかくする可能性のある残留水を防ぎます。
温度の管理: ワックスの浸透を60 °C以下に保ち、過熱を避けるために中央のホットプレートとワックスリザーバーの埋め込みを定期的にチェックし、分析用の信頼性が高く高品質のセクションを確保します。
組織サンプルに保持された空気は、ボイドを生成し、浸透を妨害し、特に肺や骨のような多孔質または高密度の組織で、不均一な切片を引き起こします。 この問題は、サンプルが固定剤に完全に沈められず、試薬の浸透をブロックし、気泡を閉じ込める固定中に始まることがよくあります。 自動組織プロセッサ、特に流体移送モデルでの不十分な真空サイクルは、空気を除去できず、品質を損なう。 エアポケットが持続し、均一な処理と下流の分析を妨げるため、密集した組織または多孔質の組織は特に傾向があります。
洗練された固定セットアップ: 完全なカバレッジを確保するために、収集直後にホルマリンのような固定剤で組織を完全に水没させます。 肺などの多孔質サンプルの場合は、固定中に真空チャンバーまたは穏やかな攪拌を使用して、閉じ込められた空気を取り除き、ポケットが持続するのを防ぎます。
最新のプロセッサを使用する: ライカペロリスなどの流体伝達組織プロセッサを活用する™とHealthSkyのティッシュプロセッサマシン、特に高密度の組織から空気を除去するための真空および圧力サイクル。 最適な結果を得るために、サンプルタイプに合わせた十分な真空時間をプログラムします。
トリムとメンテナンス: 解剖中にサンプルを4mm以下の厚さにトリミングして、固定液と試薬のアクセスを容易にし、空気の保持を減らします。 滑らかで高品質のセクションのために、不均一な染色などの空気関連の問題を見つけるために機器を維持し、スタッフを訓練します。
埋め込みや浸透が不十分であると、柔らかく、どろどろした、または不均一なブロックが生成され、ミクロトームセクショニングが困難になり、詳細な分析が妨げられます。 この問題は、脱水が不完全で、ワックスの浸透を妨げる残留水が残っている場合、またはキシレンなどの除去剤がエタノールを完全に除去できず、浸透を危うくしている場合に発生します。 改善R埋め込み中の向きは、組織の位置合わせを誤って調整し、主要な構造を覆い隠しますが、低品質または不純なパラフィンは、しっかりとしたセクション可能なブロックに必要な一貫性を欠いており、品質に影響を与えます。
徹底的な脱水を確保する: 70% 、90% 、100% の段階的なエタノールシリーズを使用し、15〜45分の手順ですべての遊離水を除去します。柔らかいティッシュを防ぎ、準備ができていることを確認するために、クリアする前に残留水分をチェックします。
クリアリングに焦点を当てる: 複数のキシレン変更 (20、20、および45分) を介して組織を実行し、エタノールを完全に置換するか、イソプロパノールでキシレンを含まないプロトコルを使用します。完全な薬剤除去のために、ワックス温度を60 ℃ よりわずかに高く調整する。
オリエントと使用品質のワックス: セクションの平面が重要であるため、研究または診断の目標に合わせて標本の説明を参照して、型の中のオリエント組織を注意深く配置します。 硬度と弾力性のためにスチレンなどの添加剤を含むプレミアムパラフィンワックスに投資し、2µ mの薄いセクションとリボンを可能にします。
検査と訓練: 一貫したワックスの品質と温度制御について、埋め込みセンターを定期的に検査します。 組織を穏やかかつ正確に処理するようにスタッフを訓練し、染色および顕微鏡用の安定した切断可能なブロックを作成します。
組織処理の間違いを防ぐことは、特に診断では非常に重要です。診断では、サンプルの損傷が診断や患者の苦痛につながる可能性があります。 エラーは、スケジューリングの不備、固定の不十分さ、または試薬の無視から発生することがよくあります。 これらを回避するには、処理スケジュールを組織の種類とサイズに一致させます。乳房組織などの大きくて脂肪の多いサンプルや小さな生検の場合は長いサンプルの短い実行を避けてください。 収集直後にホルマリンで標本を修正し、必要に応じてプロセッサに余分な時間を追加します。 次のようなツールを使用して、厳密なガイドラインに従ってエタノール、キシレン、ワックスを交換します。ライカバイオシステムズPELORIS品质管理のため。 ワックスを溶かすのに十分暖かい加熱された鉗子を使用して、骨折を避けるために埋め込み中に組織を穏やかに処理します。 ヒューマンエラーを減らすために、解剖から埋め込みまでの技術についてスタッフを徹底的に訓練します。 これらのステップは標本を保護し、研究と診断のための信頼できる結果を保証します。
高品質の組織処理には、適切な手順、高品質の素材、および細心の注意が必要です。 組織のサイズとタイプに合わせてスケジュールを調整します。たとえば、4mmのサンプルを6時間実行し、より大きな組織またはより密度の高い組織を調整します。 真空/圧力サイクルと流体循環を備えた最新のプロセッサに投資して、均一で高速な結果を出します。 エタノール、除去剤、ワックスを定期的に更新し、自動アラートを活用して一貫性を確保します。 品質を維持するために、イソプロパノールなどのより安全なキシレンフリーオプションを使用してください。 センターホットプレートとワックスリザーバーの埋め込みを確認して、熱による損傷を防ぎます。 セクションの正しい平面のための型の向きの組織。 硬度と弾力性のための添加剤を含むプレミアムパラフィンを選択し、薄いリボンのようなセクションを可能にします。 ドキュメント処理の実行、試薬の変更、およびトラブルシューティングのための機器チェック。 これらのプラクティスは、セクショニング、染色、および分析のために、一貫した高品質のパラフィン包埋標本を提供します。
HealthSkyの液体ベースのCytology装置クリーンで保存状態の良い細胞サンプルを提供することにより、診断精度を高めるように設計されています。 その高度な処理システムは、スライド上の細胞分布を均一にし、より正確な評価をサポートし、異常を見逃す可能性を減らします。 臨床検査に理想的であり、定期的な細胞学的検査に一貫性と明確さをもたらします。
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