組織処理は、組織学の基本的な手順であり、組織の収集と顕微鏡診断の間のギャップを埋めます。 臨床病理学研究室であろうと研究機関であろうと、正確で効率的な組織処理により、生物学的サンプルが構造的完全性を保持し、顕微鏡下で明確に視覚化できるようになります。 このガイドは、固定から埋め込みまでの組織処理ワークフローの包括的な概要を提供し、高品質の組織学的スライドを作成する際の各ステップの重要性を強調しています。
この記事では、組織処理に伴うもの、医学的診断と研究に不可欠な理由、およびプロセスの各フェーズが組織構造の正確な解釈にどのように寄与するかを学びます。 あなたが医学生、検査技師、または病理学の専門家であるかどうかにかかわらず、組織処理のニュアンスを理解することは、現代の組織病理学におけるその役割に対するあなたの感謝を高めるでしょう。
組織処理は、顕微鏡検査のために生体組織を準備する組織学の重要なステップです。 この多段階の手順は、新しく収集された組織サンプルを、スライドガラスに取り付けられた薄くて染色されたセクションに変換します。 これらのセクションにより、病理学者や研究者は、組織の細胞構造、構造、組成を詳細に研究することができます。
組織の処理には、通常、固定、脱水、および埋め込みの3つの主要な段階が含まれます。 これらの段階は、組織の完全性を維持し、水を除去し、パラフィンワックスのような媒体でサンプルを安定させます。 処理されると、組織はミクロトームを使用して切断され、特定の構造を強調するために染色されます。
組織処理は、組織病理学の分野が構築される基盤です。 医学的診断、特に病理学および腫瘍学では、組織処理の質が結果の精度と信頼性に直接影響します。 患者が生検または外科的切除を受ける場合、除去された組織サンプルが正確な診断の唯一のチャンスであることがよくあります。 その組織が正しく処理されていない場合、異常を検出する病理医の能力が損なわれ、遅延、欠落、または誤った診断につながる可能性があります。
医学に対する組織処理の最も重要な寄与の1つは、癌診断におけるその役割である。 病理学者は、非定型、異形成、または悪性腫瘍などの細胞異常を特定するために、処理および染色された組織の顕微鏡検査に依存しています。 これらの評価は、適切な組織の保存、切断、および染色なしでは不可能です。これらはすべて、効果的な処理にかかっています。 たとえば、組織の固定が不十分または浸透が不十分な場合、構造が歪んだり、核の詳細が不明瞭であるため、良性と悪性の変化を区別することが困難または不可能になる可能性があります。
診断だけでなく、組織処理も治療計画に不可欠です。 癌やその他の複雑な疾患の場合、組織学的分析を通じて明らかにされた組織関与の種類、グレード、および程度が臨床的決定を導きます。 外科医、腫瘍学者、およびその他の専門家は、この情報に依存して、外科的切除、化学療法、放射線療法、または免疫療法のいずれであっても、最も効果的な治療法を選択します。 組織の準備が不十分な場合、このプロセスが遅れ、患者の転帰に影響を与える可能性があります。
感染症の分野では、組織処理により、病理学者は組織切片内の真菌、細菌、寄生虫などの生物を特定できます。 よく処理された組織に適用される特別な汚れは、これらの病原体を強調し、臨床医が診断を確認して適切な治療を開始するのに役立ちます。
現代の組織学研究所は、組織の種類と状態、および診断要件に合わせたさまざまな処理技術を採用しています。 最も広く使用されている技術の2つは、パラフィンワックスの浸透と、固定、脱水、および埋め込みの組み合わせです。
パラフィンワックス浸透は、日常的な組織学で使用される最も一般的な方法です。 薄いスライスをサポートするために、組織をパラフィンに埋め込むことが含まれます。 このプロセスには次のステップが含まれます。
クリア: 組織はキシレンのような溶媒で処理され、脱水ステップからアルコールを除去します。
浸透: 溶融パラフィンワックスは、制御された温度下で組織に導入され、ワックスがすべての組織成分に浸透することを保証します。
埋め込み: 浸透が完了したら、組織を溶融ワックスで満たされた型に入れて冷却し、切断に適した固体ブロックを形成します。
パラフィン埋め込みにはいくつかの利点があります: それはprセクショニング、サンプルの長期保存、および幅広い染色技術との互換性に対する優れたサポートを提供します。
これらの3つのステップは、ほとんどの組織処理ワークフローの中核を形成します。
固定: これは最初で最も重要なステップです。 10% ホルマリンのような一般的な固定剤は、タンパク質を架橋することによって組織を安定させ、自己分解と微生物の崩壊を防ぎます。
脱水: パラフィンは水と混和しないため、水分を除去するには、上昇濃度のエタノールまたは他のアルコールを使用して組織を脱水する必要があります。
クリアリングと埋め込み: 脱水後、キシレンなどのクリアリング剤はアルコールを除去し、組織をワックスの浸透と埋め込みの準備を整えます。
代替埋め込み媒体には、電子顕微鏡に最適な樹脂と、冷凍セクション技術で使用されるゼラチンが含まれます。
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組織学における組織処理は、細胞の形態と建築の詳細の保存を確実にするために、細心の注意を払って標準化されたワークフローに従います。 わずかな逸脱でも診断の正確さや研究の完全性を損なう可能性があるため、各ステップを正確に実行する必要があります。 次の段階では、最新の組織病理学研究所で採用されている完全なシーケンスの概要を説明します。
1.総検査と標本の準備
プロセスは、新しく切除された組織標本を視覚的に検査、測定、および管理可能なサイズにトリミングするグロスから始まります。通常、厚さは3〜4 mmを超えません。 このステップは、適切な固定と一貫した処理を確実にするために重要です。 総検査は通常、訓練を受けた病理学者または組織技術者によって行われ、病理学の代表的な領域、インクマークのマージンを特定し、標本をラベル付きカセットに入れる前に重要な特徴を文書化します。
2.固定
固定は、組織構造を化学的に安定させることにより、酵素分解 (自己分解) と細菌の腐敗を停止します。 最も広く使用されている固定剤は、10% 中性緩衝ホルマリンであり、タンパク質を架橋し、その後の免疫組織化学的分析のために抗原性を保存します。 最適な固定時間は組織のタイプとサイズによって異なりますが、一般的に6〜48時間の範囲です。 固定が不十分であると、形態学的保存が不十分になり、染色が弱くなる可能性があります。
3.脱水
固定後、組織内の水を徐々に除去して、パラフィン浸潤に備える必要があります。 これは、典型的には70% から絶対アルコールに進行する一連の段階的エタノール溶液によって達成される。 徐々に脱水すると、浸透圧ストレス、組織の収縮、歪みが防止されます。自動ティッシュ加工機多くの場合、温度とタイミングを制御して、このフェーズでの一貫性と効率を高めます。
4. Clearing
パラフィンワックスはエタノールと混和しないため、脱水剤の代わりに移行溶媒 (通常はキシレンまたはキシレン代替物) が使用されます。 このステップは組織を透明にし、ワックスの浸透のために準備します。 適切なクリアリングが不可欠です。不十分なクリアリングは、不完全なワックス浸透を引き起こし、セクショニングアーティファクトをもたらす可能性があります。
5.パラフィンワックスの浸透
組織を溶融パラフィンワックスに浸し、およそ58〜60 ℃ の温度に維持する。 ワックスはクリアされた組織に浸透し、以前は細胞間液で満たされていたスペースを占めます。 この浸透は、薄く均一なスライスをセクショニングするために必要な機械的サポートを提供します。 特に繊維状または脂肪組織の完全な浸透を確実にするために、複数のワックス浴を使用することができます。
6.埋め込み
このステップでは、浸透した組織は、溶融パラフィンワックスで満たされた型内で配向され、急速に冷却されて固体パラフィンブロックを形成する。 適切な配向は、切断中に所望の組織平面を露出させるために不可欠である。 埋め込まれると、ブロックにラベルが付けられ、トリミングされて、微小切除の準備が整います。
7. Sectioning
通常3〜5マイクロメートルの厚さの薄い部分は、回転式ミクロトームを使用してパラフィンブロックから切り取られます。 これらのセクションのリボンは、しわや折り目をリラックスさせるために温水浴 (約40〜45 °C) に浮かせてから、ガラスに移します顕微鏡スライド。 切断が不十分な部分が診断機能を覆い隠す可能性があるため、微小切除中の精度は非常に重要です。
8.染色
染色されていない組織切片は半透明に見え、コントラストがありません。 染色は色とコントラストを与え、細胞構造と細胞外成分を光学顕微鏡で区別できるようにします。 最も一般的な日常的な染色は、ヘマトキシリンとエオシン (H & E) であり、ヘマトキシリンの染色は核が青紫色で、エオシンは細胞質と細胞外タンパク質をピンク色に染色します。 特定の病原体、タンパク質、または組織成分を検出するために、追加の特別な染色または免疫組織化学を使用することができます。
9.取り付け
染色後、スライドを再び脱水し、キシレンを用いて透明にする。 次に、合成樹脂または取り付け媒体を使用してカバースリップを固定します。 このステップは、組織切片を保護するだけでなく、光学顕微鏡に適した屈折率を提供し、透明度と寿命を高めます。
10.ラベリング、品质管理、およびアーカイブ
完成した各スライドには、患者の識別、症例番号、および標本の詳細が正確にラベル付けされています。 品質管理は、診断解釈のためにスライドがリリースされる前に、染色の品質と組織の完全性を評価するために実行されます。 アーカイブされたスライドとブロックは、法的文書、調査参照、および遡及的分析のために規制された条件で保存されます。
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