組織処理の紹介

「組織処理」とは、固定段階から適切な組織学的ワックスが十分に浸透した状態まで、動物または人間の組織を準備する一連の必要なステップを指します。ミクロトームで切断することができます。

組織処理の重要性

研究所の管理者は、スタッフにとって組織処理の重要性を強調することがよくあります。 不適切な処理スケジュールを使用したり、根本的なエラー (誤った補充や試薬の配列決定など) を作成したりすると、組織標本が切断できなくなる可能性があることを理解することが重要です。 これは、有用な視覚情報が得られないことを意味します。 この状況は、標本全体が単一のバッチで処理されるため、人間の診断組織では特に深刻です。 そのような場合に組織が損傷した場合、さらなる分析に利用できる予備の組織がない可能性があり、診断ができなかった理由を研究室が患者に説明しなければならない状況につながります。 の機械的または電気的な故障がありますが自動ティッシュ加工機発生する可能性があり、ほとんどの処理の問題はヒューマンエラーによって引き起こされます。 したがって、組織処理担当者のための適切な教育とトレーニングの重要性を強調することが重要です。 最良の結果を確実にするために、実行用の処理プログラムを設定するときは注意が必要です。

パラフィンセクション組織処理ステップの概要

1.新鮮なサンプルを集める

新鮮な組織サンプルはさまざまなソースから来ており、患者や実験動物から取り除くと損傷を受けやすくなります。 したがって、それらは慎重に取り扱われ、解剖後できるだけ早く固定されなければならない。 理想的には、固定は、手術室などの抽出部位で行われるべきである。 これが実行不可能な場合は、研究所に到着したらすぐに修正する必要があります。

2.固定

検体は、ホルマリンのようなホルムアルデヒド溶液のような液体固定剤に浸される。 この薬剤は徐々に組織に浸透し、化学的および物理的変化を誘発して、組織を硬化させて保存し、その後の処理段階で組織を保護します。 固定に適した特定の特性を持たなければならないため、固定に適した試薬はごくわずかです。 例えば、組織成分は、後で特定の染色技術を適用するために特定の化学反応性を保持しなければならない。 ホルマリン (通常はリン酸緩衝) は、パラフィン切片に加工される組織を保存するために最も一般的に使用される固定剤です。 理想的には、標本はすべての組織部分に浸透するのに十分な時間固定溶液に留まり、その後、固定化学反応が平衡化することを可能にする期間が続く必要があります (固定時間)。 一般に、検体の固定時間は6〜24時間であるべきである。 ほとんどの研究所は、固定ステップを処理プログラムの最初の段階と見なしています。 固定後、標本は評価のために適切な領域を選択するためにさらに解剖する必要があるかもしれません。 処理された標本は、他の標本と区別するために、適切にラベル付けされたカセット (小さな穴あきバスケット) に入れられます。 標本の取り扱い期間は、最大および最小の標本のサイズとタイプ、使用する特定の処理装置、選択した溶媒、溶媒温度、およびその他の変数によって異なります。

3.脱水

溶融パラフィンワックスは疎水性であるため (水とよく混合しない) 、ワックス浸透前にサンプルから大部分の水を除去する必要がある。 このプロセスでは、通常、サンプルを濃度が上昇する一連のエタノール (アルコール) 溶液に浸し、絶対エタノールで最高潮に達します。 エタノールは任意の比率で水と混合し、サンプル中の水を徐々にアルコールに置き換えることができます。 徐々に増加する濃度シーケンスを使用すると、過度の組織変形が最小限に抑えられます。

4mm以下のサンプルの場合、典型的な脱水シーケンスは次のとおりです。

70% エタノール15分

90% エタノール15分

100% エタノール15分

100% エタノール15分

100% エタノール30分

100% エタノール45分

この時点で、厳密に結合した (分子) 水の最小量を除いて、サンプルの水はすべて除去されるべきである。

4. Clearing

残念ながら、組織の水分含有量は最小限に抑えられていますが、ワックスとエタノールがうまく混合されないため、ワックスを浸透させることはできません。 したがって、エタノールとパラフィンワックスの両方と相溶性の中間溶媒を使用する必要があります。 この溶媒は組織内のエタノールを置き換え、次に溶融パラフィンワックスに置き換えられます。 プログラムのこの段階は「クリアリング」と呼ばれ、使用される化学物質は「クリアリング剤」として知られています。「クリアリング」という用語は、多くの (全てではないが) クリアリング剤が、それらの比較的高い屈折率のために、組織にある程度の光学的透明性または透明性を提供し得るために選択された。 別の重要な除去剤の機能は、脂肪がワックスの浸透を妨げるため、組織から大量の脂肪を除去することです。

キシレンは一般的に使用されるクリアリング剤であり、エタノールを完全に置き換えるには複数の変更が必要です。

4mm以下の標本の場合、典型的なクリアリングシーケンスには、キシレン20分、キシレンさらに20分、キシレン45分が含まれます。

5.ワックスの浸透

この段階では、組織に適切な組織学的ワックスが浸透します。 このタスクを達成するために、長年にわたって多くの異なる試薬が評価および使用されてきましたが、パラフィンベースの組織学的ワックスが依然として最も広く使用されています。 標準ワックスは60 °Cで液体のままで、この温度で組織に導入し、20 °Cに冷却して、一貫した切断に適したテクスチャに固化します。 これらのワックスは、精製パラフィンと、おそらくスチレンやポリエチレンなどの樹脂を含むさまざまな添加剤で構成されています。 これらのコンポーネントには特定の物理的特性があり、ワックスを2ミクロンの狭い薄いスライスに分割し、ミクロトームで切断するとリボンを形成できることを理解することが不可欠です。温水浴に浮かせたときに平らに保つのに十分な柔軟性を維持します。

4mm以下のサンプルの場合、典型的な浸透シーケンスは次のとおりです。

ワックス30分

ワックス30分

ワックス45分

6.埋め込みまたはブロッキング

標本にワックスが完全に浸透したら、それらを「ブロック」に成形して、切断のためにマイクロトームに取り付ける必要があります。 このプロセスでは、溶融ワックスが型に注がれ、標本が型に配置される「埋め込み中心」を使用します。 標本の位置が「セクショニングの平面」を決定するため、金型内の標本の適切な向きに特に注意を払うことが重要です。これは、診断および研究組織学に不可欠です。 次に、埋め込みリングを金型の上に置き、さらにワックスを追加し、アセンブリ全体をコールドプレート上に置いて固化させます。 このプロセスが完了すると、組織ブロックと取り付けられた埋め込みリングを金型から取り外して、微小切除の準備をすることができます。 組織処理が正しく行われれば、組織標本を含むワックスブロックは非常に耐久性があり、重要なアーカイブ材料として役立つことができることは注目に値します。